Цитогенетические методы | Генотехнология

Цитогенетические методы

Цитогенетические методы, применяемые для диагностики гемобластозов и других заболеваний системы кроветворения, включают в себя стандартное цитогенетическое исследование (СЦИ) и флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH).

При помощи  СЦИ анализируют хромосомы метафазных пластинок, обработанных таким образом, чтобы можно было получить характерную исчерченность хромосом, позволяющую их идентифицировать (Рис.1), а также выявлять перестройки отдельных хромосомных сегментов, называемых локусами.

Рис. 1. Стандартное цитогенетическое исследование (47,XY,+12).

Для многих видов гемобластозов известны повторяющиеся маркерные хромосомные аномалии: транслокации, делеции, инверсии, а так же численные аномалии (моносомия, трисомия). Обнаружение таких маркерных хромосом позволяет устанавливать однозначный диагноз и контролировать динамику роста опухолевой массы. Кроме того, в опухолевых клетках у больных гемобластозами часто возникают дополнительные хромосомные поломки, это явление называют клональной эволюцией опухоли. Клональная эволюция опухоли, которую обнаруживают при помощи СЦИ, является важным прогностическим признаком. Возможность выявления многочисленных дефектов хромосом при помощи СЦИ является важным преимуществом этого метода. Однако чувствительность СЦИ не превышает 5%, поэтому при значительном снижении опухолевой массы на фоне проводимой терапии дальнейший мониторинг необходимо осуществлять при помощи молекулярных методов, а также при помощи FISH.

Метод FISH основан на использовании протяженных ДНК-зондов, комплементарных тем хромосомным локусам, в которых при гематологических заболеваниях происходят перестройки. Современные зонды для  FISH несут в своем составе флуоресцентные группировки, позволяющие визуализировать точки связывания зондов с соответствующими локусами, причем не только в хромосомах из метафазных пластинок, но и в том случае, когда они находятся в интерфазных ядрах (Рис.2).

Рис. 2 Транслокация (9;22). Зонд  ON BCR/ABL t(9;22) Dual-color Extra Signal (Kreatech)  красный сигнал 9q34, включающий ген ABL, зеленый сигнал -22q11, включающий ген BCR. Место наложения сигналов - слитый ген BCR/ABL.

Рис. 3 Амплификация гена KMT2A (MLL) Зонд ON MLL (11q23), Break

Красный и зеленый сигналы визуализируют увеличение числа копий гена МLL.

 

В связи с этим чувствительность метода FISH оказывается на порядок выше, чем у СЦИ, однако все же уступает на 1-2 порядка чувствительности молекулярных методов.